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无菌转接
2022-06-25

无菌转接

(一)实验目的

通过超净工作台上的转接操作反复训练,强化的无菌转接操作技能。

(二)实验用具与材料

超净工作台、70%酒精、酒精灯、已灭菌的18cm-20cm手术弯剪、2%新捷尔灭溶液、纱布、广口瓶、记号笔、装培养瓶的篮框、污染玻璃瓶、试管刷。试管苗、盛有培养基的培养瓶。

(三)实验学时与场地

8学时,植物组培实验室

(四)实验内容

1、准备工作:

⑴在准备室肥皂洗手,换上工作服、拖鞋等。

⑵开启工作台紫外灯和房间紫外灯,10分钟后打开超净工作台的风机,开启紫外灯15分钟后关闭,风机不关。

⑶再清洁

用2%新捷尔灭擦拭双手和超净工作台台面。

2、转接操作:

⑴放置培养瓶、器械

将试管苗及培养瓶用2%新捷尔灭擦拭干净,放入超净工作台内,分作两边放置。剪刀取出后放入酒精瓶中,切忌扔在台面,使用时需用火焰灭菌5分钟。

接种器械是影响转接成功的关键因素,一定要剪刀前端、中部、正面、背面均烧到位,保证无菌。

⑵转接

左手握住新培养瓶,打开瓶盖,灼烧瓶口,同时将接种器械放入培养瓶内壁冷却。转接一瓶试管苗,每次剪取带1-2片芽和叶的茎段插入培养基中,一瓶转接入三瓶新培养基中,每瓶内试管苗均匀放置,长度一致(1-2cm)。

转接中防止污染,随时带着有菌观念,进行无菌操作,器械不能碰触超净工作台及培养瓶外侧,更不能伸出工作台外面。

3、整理清洁

转接完后,用特种笔在每瓶培养基上记录:转接的试管苗品种符号、日期、转接人,以备以后观察。

清洁台面、器械、以及无菌接种室。

4、注意事项

⑴清洁台面时,酒精不能擦拭工作台四周侧面,只能用2%新捷尔灭擦拭。

⑵接种器械必须灼烧到位,防止带菌,培养瓶口也需灼烧。

⑶转接时,手不能解除培养瓶口及试管苗,也不能接触接种器械中上部要伸进培养瓶的部位。

⑷培养瓶盖必须立放,器械不能掉落在台面上,或碰触工作台周边,如有立即换器械。

⑸操作要迅速,如培养瓶和试管苗暴露过久,污染机会增多。

⑹转接中还应注意试管苗状态,如是真菌污染苗,不能转接,细菌苗不是很严重的,视情况可转接上部。

⑺清洗器械时,注意用钢丝刷清洗掉容易藏污的地方,母瓶不用要将培养基倒出,将瓶洗净,纱布也要洗净。

(五)作业

写出实训报告,分析实践结果及体会。

(六)评分标准

无菌转接程序正确,操作熟练迅速,培养瓶内分布均匀,茎段高度一致,污染率低于5%。